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實驗服務

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分子互作實驗
雙熒光素酶檢測-miRNA-靶基因驗證
周期:.
規格:.
貨號:PR-003413
單位:套
價格:詢價
品牌:載基生物

? 服務介紹
      雙熒光素酶檢測利用兩種不同的熒光素酶(如螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶)的相對表達量來檢測特定基因的活性。通過比較實驗組和對照組中兩種熒光素酶的發光強度,可以準確評估靶基因的表達水平或啟動子的活性。

①雙熒光素酶-靶基因檢測:在雙熒光素酶系統中,通常將目標基因的調控序列(如啟動子)與螢火蟲熒光素酶基因連接在一起。當目標基因被激活時,螢火蟲熒光素酶會發出熒光,從而實現靶基因的檢測。

②雙熒光素酶-啟動子檢測:通過將感興趣的啟動子序列克隆到熒光素酶報告基因的上游,檢測啟動子的活性。不同條件下啟動子活性的變化可以通過熒光強度的變化來反映,從而研究基因表達的調控機制。


?
 載基服務優勢

實驗優勢:①免費、專業的結合分析;
                ②豐富的載體選擇,免費提供293T作為工具細胞;
                ③快速的克隆構建;
                ④完善的配套細胞學驗證。


? 實驗步驟
1.酶標儀先開起來預熱。
2.
小心吸棄培養液,PBS洗一次。
3.5x的細胞裂解液用PBS稀釋成1x,500ul/孔,搖勻后室溫靜置10min,直到細胞全部裂解
下來。
4.
底物配置:螢火蟲:干粉+稀釋液,混勻后直接使用,100ul/孔。海腎:50x的原液用稀釋液稀釋成1x,100ul/孔。每個樣本3個復孔,空白對照3個復孔,例6個樣本,要配(6*3)+3=21個孔,多配2孔的量避免加樣過程的消耗,也就是23孔*100ul=2300ul的螢火蟲和海腎的量。配完這兩個底物要避光保存。
5.
將裂解物吹打下來,收集到1.5ml的EP管中(避免氣泡),12000g,5min離心,收集200ul的上清液到新管中。
6.
取出黑色96孔板,先加100ul的螢火蟲底物到孔中,隨后立即加入20ul的樣本上清液(速度要快,不要有氣泡),上機測螢火蟲的值,保存數據。
7.
再疊加100ul海腎底物,上機測海腎的值,保存數據。

? 產品目錄表

發貨標準:雙熒光素酶檢測原始數據、完整的實驗報告和數據分析。
客戶提供:靶基因、miRNA名稱及種屬進行評估和報價。


? 結果示例

? 實驗交付



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